Quickcomputerstips
- Cum funcționează sistemul Flp In?
- Cum funcționează FLP FRT?
- Puteți transfecta celule de două ori?
- Ce sunt liniile celulare stabile?
- Ce este o celulă HEK?
- Este reversibilă recombinarea Cre?
- Ce înseamnă Cre la șoareci?
- Cum este creat mouse-ul Cre?
- Ce este Cre la șoareci?
- Serul inhibă transfecția?
- Care este diferența dintre electroporare și nucleofecție?
- FBS inhibă transfecția?
- De ce folosim celule CHO?
- Care celule se divid continuu?
- Care este diferența dintre transfecția stabilă și cea tranzitorie?
Cum funcționează sistemul Flp In?
Sistemul Flp-In™ eficientizează generarea de linii celulare stabile de expresie de mamifere, profitând de un sistem de recombinare ADN derivat din Saccharomyces cerevisiae. ... În sistemul Flp-In™, trei vectori diferiți sunt utilizați pentru a genera linii izogenice stabile de celule de mamifere care exprimă gena (genele) de interes.
Cum funcționează FLP FRT?
Proteina Flp, la fel ca Cre, este o recombinază specifică locului din familia tirozinei. Această familie de recombinaze își îndeplinește funcția printr-un mecanism de topoizomerază de tip IB care determină recombinarea a două catene separate de ADN. Recombinarea se realizează printr-un proces repetat în două etape.
Puteți transfecta celule de două ori?
Da, poate fi transfectat, în principiu. ... Deci, când ați transfectat celulele stabile pentru a doua oară cu aceeași plasmidă, ați observat vreo creștere a expresiei transgenei sau vreo modificare a numărului de copii de expresie??
Ce sunt liniile celulare stabile?
Liniile celulare stabile sunt instrumente esențiale de laborator care pot fi utilizate pentru a exprima cantități mari de proteine de interes. ... Liniile celulare se reproduc la infinit și continuă să exprime transgena în mod constant în acea perioadă de timp.
Ce este o celulă HEK?
De la Wikipedia, enciclopedia liberă. Celulele 293 ale rinichiului embrionar uman, adesea denumite și celule HEK 293, HEK-293, 293 sau mai puțin precis celule HEK, sunt o linie celulară specifică imortalizată derivată dintr-un făt avortat sau celule renale embrionare umane crescute în culturi de țesuturi prelevate din un făt de sex feminin în 1973.
Este reversibilă recombinarea Cre?
Toate evenimentele de recombinare mediate de FLP sau Cre sunt reversibile. ... Deoarece recombinarea poate avea loc numai între situsurile țintă ale aceleiași secvențe în vectorii FLEx, secvența ADN care ar trebui inversată este flancată de două perechi de situsuri țintă care diferă în secvența lor.
Ce înseamnă Cre la șoareci?
A fost aplicat cu succes în drojdii, plante, culturi de celule de mamifere și șoareci (Araki și colab. 1987). Se bazează pe capacitatea genei recombinazei (cre) de recombinare a ciclizării bacteriofagelor P1 (Cre) de a efectua recombinarea între perechile de situsuri loxP.
Cum este creat mouse-ul Cre?
Sistemul Cre-loxP este o tehnologie puternică utilizată pe scară largă pentru editarea genelor de mamifere. ... Șoarecii knockout condiționati sunt apoi generați prin reproducerea tulpinii Cre-driver cu o tulpină de șoarece floxed (Figura 1B). Specificitatea și momentul recombinării sunt controlate de promotorul și/sau amplificatorul utilizat.
Ce este Cre la șoareci?
Sistemul Cre/lox este unul dintre cele mai puternice și versatile instrumente dezvoltate pentru genetica șoarecilor. Le oferă cercetătorilor de șoarece un control sofisticat asupra locației și momentului exprimării genelor. Cre/lox este de obicei folosit pentru a face alele knockout, dar poate fi folosit și pentru a activa expresia genelor.
Serul inhibă transfecția?
Calitatea serului poate afecta semnificativ creșterea celulelor și rezultatul transfecției. Prin urmare, este important să se controleze variabilitatea între diferite mărci sau chiar diferite loturi de ser pentru a obține cele mai bune rezultate. După ce ați testat serul pe celulele dvs., continuați să utilizați același ser pentru a evita variația rezultatului.
Care este diferența dintre electroporare și nucleofecție?
Pe baza metodei fizice de electroporare, nucleofecția folosește o combinație de parametri electrici, generați de un dispozitiv numit Nucleofector, cu reactivi specifici de tip celular. ... În schimb, alte metode de transfecție non-virale utilizate în mod obișnuit se bazează pe diviziunea celulară pentru transferul ADN-ului în nucleu.
FBS inhibă transfecția?
BSA conținut în FBS va bloca două lucruri, agregarea necesară pentru ca reactivul dvs. cu ADN să se sedimenteze și sarcina pozitivă a acestor particule necesară pentru a intra în celule, împiedicând eficiența acestora. ... Eficiența transfecției în acest caz nu va fi sever împiedicată.
De ce folosim celule CHO?
Celulele CHO au devenit populare deoarece au un număr scăzut de cromozomi și au fost folosite pentru a studia genetica. ... Aceste caracteristici au făcut din celulele CHO cea mai importantă linie celulară pentru producerea de proteine terapeutice, inclusiv anticorpi umanizați.
Care celule se divid continuu?
Celulele labile se divid continuu și includ celule epiteliale de suprafață, cum ar fi celulele epiteliale scuamoase stratificate ale pielii și celulele epiteliale columnare ale tractului gastrointestinal.
Care este diferența dintre transfecția stabilă și cea tranzitorie?
În transfecția stabilă, ADN-ul plasmid se integrează cu succes în genomul celular și va fi transmis generațiilor viitoare ale celulei. Cu toate acestea, în transfecția tranzitorie, materialul transfectat intră în celulă, dar nu se integrează în genomul celular.
